ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)因其靈敏度較高、特異性較好而廣泛應(yīng)用于臨床上，但操作中的各環(huán)節(jié)對(duì)檢測(cè)效果影響較大，稍不注意，就有可能導(dǎo)致顯色不全、花板。

問(wèn)題主要集中在這幾個(gè)方面：選材、加樣、孵育、洗板、顯色、終止、讀板。問(wèn)題及解決方案具體解析如下：

選材

選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，操作前將試劑在室溫下平衡 30-60 分鐘。

加樣

出現(xiàn)問(wèn)題可能原因

1. 血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。

2. 手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）。

3. 加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

解決方案

1. 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放 1-2 小時(shí)后，再用 3000 rmp 離心 15 分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合 5-10 次，放置一段時(shí)間后，3000 rpm 離心 15 分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在 2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于 -20℃的低溫冰箱內(nèi)。

2. 加樣后及時(shí)放入孵箱。

3. 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

4. 如果采用 AT 或其他全自動(dòng)加樣，選擇 FAME 或其他后處理儀器加酶試劑。

5. 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。

孵育

出現(xiàn)問(wèn)題可能原因

1. 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*。

2. 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。

解決方案

1. 貼封片或加蓋；

2. 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。

洗板

出現(xiàn)問(wèn)題可能原因

1. 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。

2. 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。

3. 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。

解決方案

1. 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干。

2. 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。

顯色

出現(xiàn)問(wèn)題可能原因

1. 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑。

2. 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。

解決方案

1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的 TMB 顯色劑不用。

2. 加樣時(shí)保持顯色劑不外流。

3. A、B 液應(yīng)避免接觸金屬器械。

終止

出現(xiàn)問(wèn)題可能原因

加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。

解決方案

加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

讀板

出現(xiàn)問(wèn)題可能原因

讀板時(shí)板底不清潔。

解決方案

應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。